會員登錄
                        當前位置:解決方案

                        無細胞蛋白表達系統

                        發布日期:2012年07月24日   瀏覽次數34525

                         

                         無細胞蛋白表達系統,含有蛋白合成所需各主要組分(氨基酸、酶、各種因子等),不受細胞核(核酸DNA/RNA)、線粒體、細胞骨架等的干擾,能夠在體外快速、大量表達蛋白。體外無細胞蛋白表達系統分為原核和真核兩大類,原核系統以細菌裂解物為基礎,如大腸桿菌系統;真核系統以真核細胞裂解物為基礎,包括麥胚系統、昆蟲系統、兔網織紅細胞系統等。這一真正的“開放”系統,能夠特異性表達目的蛋白,產生的蛋白可用于蛋白質功能檢測、結構分析等下游實驗。該系統應用至今,已成功表達超過2 萬種蛋白,其中包括13364 個人類的基因。部分數據列表如下:



                        無細胞蛋白表達系統特點

                        ■ 操作簡便:只需按照說明書添加各種成分即可,像做PCR 一樣簡單

                        ■ 需時短:只需2-24 小時即可完成實驗

                        ■ 表達量高:可實現規模表達,最大表達量可達50 mg/10 ml 反應體系

                        ■ 輕松表達困難蛋白:突破傳統細胞內表達的極限,實現毒蛋白、膜蛋白、包涵體及不溶蛋白的表達

                        ■ 蛋白共表達:可以進行多個模板的同時表達

                        ■ 開放系統:能夠添加蛋白酶抑制劑、稀有密碼子,進行氨基酸標記等


                        無細胞蛋白表達系列技術簡介

                        CFS無細胞蛋白表達系列為真核體外無細胞蛋白表達系統,使用獨特的技術去除了翻譯抑制物的麥胚提取物(WEPRO ),能夠大量表達可溶性的全長蛋白。該系列產品采用非偶聯的轉錄和翻譯系統,目的蛋白得率與RTS 系列產品相當。

                        1)CFS 無細胞蛋白表達原理

                        * 非偶聯的轉錄和翻譯系統

                        CFS 系列產品中包括模板構建、轉錄和翻譯反應所需全部試劑。首先構建攜帶SP6 啟動子、E01 增強子、目的基因的線性模板或質粒,隨后在轉錄反應液中進行體外轉錄,再以獲得的mRNA 為模板進行翻譯反應。翻譯反應有三種方法可供選擇,分別為Bilayer Reaction Method、Repeated Batch Method、Filter-and-Feed Method,這些方法都可以和儀器配合使用,其中Bilayer Reaction Method 手工操作非常簡便,因此被廣泛使用。


                        * 多種翻譯系統

                        對于WEPRO 而言,前期的模板準備和轉錄mRNA 相同,不同的是翻譯系統,可以采用以下三種方法進行翻譯。Bilayer Reaction Method 利用反應液和麥胚裂解物之間的密度差相互滲透,在液面相交處進行反應,隨著時間的推進,溶液逐漸由兩相變為單一混合物而終止。用移液器混勻后,即得到包含目的蛋白的溶液。該方法可以與自動化儀器(Protemist DT II, GenDecoder )配合使用。也可以手工操作(請參見說明書)。Repeated Batch Method 通過離心的方式不斷的使反應液通過麥胚裂解物,從而不斷的合成目的蛋白,該方法既可以手工操作(需要離心機),也可以配合儀器使用。Filter-and-Feed Method 利用 Protemist XE 儀器,不斷供給mRNA 和翻譯反應液,并過濾掉翻譯反應的副產物,從而大規模生成目的蛋白。













                         

                        Premium

                        PLUS
                        Expression

                        Kit

                        WEPRO1240

                        系列

                        WEPRO7240

                        系列

                        1240

                        1240H

                        1240G

                        7240

                        7240h

                        7240g

                        最大得率/反應

                        40 μg

                        20 μg

                        100 μg

                        500 μg

                        40 μg

                        200 μg

                        1 mg

                        標準反應體系

                        226 μl

                        226 μl

                        1.2 ml

                        6 ml

                        226 μl

                        1.2 ml

                        6 ml

                        模板類型

                        線性/ 質粒

                        質粒

                        質粒

                        質粒

                        質粒

                        質粒

                        質粒

                        反應時間

                        16h

                        16h

                        16h

                        16h

                        16h

                        16h

                        16h

                        反應溫度

                        15

                         /26

                        15

                        /26

                        15

                         /26

                        15

                        /26

                        15

                        /26

                        15

                        /26

                        15

                        /26























                        了解CFS更多產品,可點擊進入CFS官網

                        http://www.cfsciences.com/eg/index.html


                        地址:北京市海淀區西小口路66號東升科技園(北領地)C7-3 電話:800-990-6057
                        京ICP備14016832   京公網安備11010802015827  天根生化科技(北京)有限公司 ? 版權所有
                        互博线上娱乐